最新实验二、细菌的分离培养、生化反应、药物敏感实验-药学医学精品资料

发布时间:2021-09-19 09:48:53

实验二、细菌的分离培养、生化反应、理化因素作用 江振友 实验内容 ? ? ? ? ? 1.细菌分离 2理化因素作用 3菌落,色素,溶血现象 4细菌生化反应 5 药物敏感实验 细菌人工培养接种法 ? ? ? ? ? ? 分离培养法:1*行划线法 2分区划线法 纯种接种法: 1斜面培养基接种法:纯培养和保存菌种 2 液体培养基接种法:增菌 3半固体穿刺接种法:保种和观察细菌动 力和生化反应 外界因素对细菌的影响 ? 消毒与灭菌 ? 消毒:指杀死病原微生物,但不包括芽 胞。 ? 灭菌:是指杀灭物体上所有微生物,包 括 ? 繁殖体和芽胞。 ? 无菌:物品中没有活的微生物存在。 ? 防腐:是指防止或抑制微生物生长繁殖。 ? 消毒剂:高浓度 ? 防腐剂:低浓度 外界因素对细菌的影响 消毒、灭菌的方法一般可分为: 热力灭菌法 辐射杀菌法 滤过除菌法 超声波杀菌法 干燥和低温抑菌法等 物理学方法 化学方法 ? (一) 热力灭菌法 ? 分类:干热灭菌法 ? 湿热灭菌法 ? ? ? ? ? 1 干热灭菌法 A 焚烧: B 烧灼: C 干烤:160°~180℃,2h D 红外线灭菌: ? 2.湿热灭菌法 ? A 巴氏消毒法: ? 61.1-62.8℃,30 min ? 71.7℃,15-30sec B 煮沸消毒法: ? 100℃,5min -10min C 流通蒸气消毒法: ? 100℃,15-30min ? D 间歇蒸汽灭菌法: ? 100℃,15-30min,37℃过夜(3次) E 高压蒸气灭菌法: ? 15磅(121.3℃),15-30min ? 湿热比干热灭菌好的原因: ? ? ? ? ? ? 1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性 2 湿热穿透力强 3 湿热蒸气有潜热存在,水蒸气凝固 成水释放潜热,迅速提高被灭菌物 体的温度 ? 二)光线与射线的消毒作用 ? 1 日光与紫外线 ? 机理:损坏DNA构型->细菌死亡或变 异 ? 特点:穿透力弱 ? 2 电离辐射:包括X射线和γ射线 ? 机制:干扰DNA的合成;破坏细胞膜; ? 产生过氧化氢等 ? 特点:穿透力强,不升高温度 ? 三)滤过除菌法 ? 用滤菌器除去液体及空气中的细菌 ? 用于不耐热的血清、毒素、抗生素 ? (四)超声波的消毒作用 ? 可裂解细菌,尤其对G+更敏感 ? 主要用于粉碎细胞,提取细胞组分或制 备抗原等 菌落:经过18—24h培养后,单个细菌分裂 繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。 ? 色素:某些细菌能产生不同颜色的色素, 有助于鉴别细菌。 ? 溶血现象:有些细菌产生溶血素,当接 种于血*板培养基上可在菌落周围形成 溶血环,有助于鉴别细菌。细菌性溶血 素指由细菌产生的任何*毒素。溶血 素是一种可使红血球细胞溶解的毒素 琼脂*板划线分离法 原理见43页 1以接种环沾取少许标本先涂布于*板培养基一 角,然后将接种环置于火焰上灭菌,待冷却 2与涂菌液处开始作为第一区划线,划线时接种 环与培养基表面呈45度角,划线毕,接种环灭 菌 3然后于第二区处再划线,且在开始划线时与第 一划线相交接数次,以后划线不必再交接 4待第二区完时如上法灭菌,接种划线,依次至 最后一区,接种环灭菌,这样每一区的划线内 的细菌处逐渐减少,即可获得单个菌落。划线 接种完毕,*板倒置,做好标记,于37度温箱 培养 紫外线对细菌的作用 ? 原理见52页 ? 1用接种环沾取大肠杆菌液,放到普通琼 脂*板上,每板放两环,然后用扩散棒 来回涂布整个*板表面 ? 2将涂布细菌的*板放入接种箱内。打开 *板并用玻璃盖遮住*板的一半,在紫 外线下直接照射30分钟 ? 3照射完毕,盖好琼脂*板,放37度温箱 孵育24小时,观察结果 染料对细菌的影响 ? 原理:由于细菌本身无色半透明,其析 光性和周围环境差别不大,未经染色则 不易观察其结构,故需要通过染色使其 找色,以便在显微镜下观察 ? 1用灭菌接种环取大肠杆菌及白色葡萄球 菌各接种于龙胆紫琼脂斜面上 ? 2置37°C温箱24小时后观察结果

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